生化培養(yǎng)箱多管發(fā)酵法與濾膜法介紹
發(fā)布日期：2015-01-20點(diǎn)擊次數(shù)：2936
1.初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)
生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管內(nèi)裝有單倍或三倍乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，并在內(nèi)倒置有小玻璃管。每個(gè)樣品用三個(gè)不同的水樣量接種，同一接種水樣量要有五管，將水樣分別接種到裝有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的 生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管中，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h。乳糖能起選擇作用，因?yàn)楹芏嗉?xì)菌不能發(fā)酵乳糖，而大腸菌群能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣。培養(yǎng)液中加入溴甲酚紫作為酸度指示劑，細(xì)菌產(chǎn)酸后，培養(yǎng)液即由原來的紫色變成黃色。產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管表明試驗(yàn)陽性，如在倒管內(nèi)產(chǎn)氣不明顯，可輕拍發(fā)酵管，有小氣泡升起為陽性。
2.復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)
輕微振蕩初發(fā)酵試驗(yàn)陽性結(jié)果的 生化培養(yǎng)箱發(fā)酵管，用3mm接種環(huán)將培養(yǎng)物(2-3環(huán))轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24h±2h(提高培養(yǎng)溫度可造成不利于來自自然環(huán)境的大腸菌群的生長)。培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣則證實(shí)為糞大腸菌群陽性。
二、濾膜法
生化培養(yǎng)箱濾膜是一種微孔性濾膜，孔徑0.45μm。將水樣注入已滅菌的放有濾膜的過濾器中，經(jīng)過抽濾，細(xì)菌即被截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上，在44.5℃±0.5℃下培養(yǎng)24 h±2h。糞大腸菌群菌落在M-FC培養(yǎng)基上呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，其他非糞大腸菌群菌落成灰色、淡黃色或無色。正常情況下，由于溫度和玫瑰酸鹽試劑的選擇性作用，在M-FC培養(yǎng)基上很少見到非糞大腸菌菌落。